于辉     赵洛沙

郑州大学第一附属医院心血管内科   河南郑州   450052

背景和目的

流行病学研究发现，高脂血症、高血压、吸烟、 糖尿病及心血管疾病家族史是冠心病（coronary heart disease，CHD）发生的危险因素，但这些传统的危险因素不能完全解释和预测冠心病的发生发展。近来一些研究发现冠心病是由遗传因素与环境因素共同参与其发生发展的复杂疾病，但是关于冠心病的具体发病机制仍未阐明清楚。

一氧化氮（NO）是由内皮细胞型一氧化氮合酶（eNOS）催化生成，研究发现内皮细胞释放的NO可以调节血管舒缩，调节血流，抑制血管平滑肌细胞增殖，抑制血小板和白细胞黏附，因而具有抗动脉粥样硬化、调节血压和主要器官血流量、抗血栓作用，是体内重要的心血管保护因子。eNOS是左旋精氨酸一氧化氮途径的唯一限速酶，其基因的突变可能影响eNOS蛋白的功能活性，从而降低体内NO的生成，加速动脉粥样硬化和冠心病的发展。因此eNOS基因被认为是冠心病研究的候选基因。

  凝血因子Ⅶ（FⅦ）是外源性凝血途径中的第一个催化酶，外源性银血途径在在血凝块生成中扮演了必不可少的角色。研究表明血浆中FⅦ升高是冠心病的危险因素，特别是与致命性心血管事件明显相关。而血浆中FⅦ水平是由遗传因素和环境因素相互作用共同决定的。FⅦ基因突变可以降低FⅦ活性，从而降低心血管病死亡率。

eNOS基因和FⅦ基因被列为冠心病的候选基因。为进一步探讨遗传性高危因子基因多态性与冠心病的关系，本文采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）技术，探讨eNOS基因4a／b多态性、G894T多态性以及FⅦ基因R353Q多态性在中国河南汉族人群中的分布情况，并进行CHD经典危险因子和家族史调查，旨在探讨基因多态性与冠心病的发生及心肌梗死风险的关系。

材料与方法

1病例组  选取CHD患者207例，来源于2004年9月～2005年3月河南省心内科住院患者，男性147例，女性60例，年龄62.97±12.00（34~89）岁。其中心肌梗死120例，不稳定型心绞痛87例。CHD组中147例患者经冠状动脉造影。冠脉造影时，各主要分支狭窄≥75%定义为有意义病变。本研究人群均为河南汉族人。

2 对照组  正常对照组选自同期门诊体检的健康随机个体，共264例，其中男性192例，女性72例，年龄63.43±10.26（34~88）岁。经详细病史询问，体格检查及实验室检查均未见异常，并除外有心脑血管病或糖尿病家族史者。本研究人群均为河南汉族人。

方法  取外周抗凝静脉血4ml，应用标准的酚-氯仿法提取白细胞基因组DNA。设计引物，采用PCR-RFLP技术扩增目的带及酶切扩增产物，在2.5%的琼脂糖凝胶中电泳，在紫外照射仪上监测结果并摄影分析。

统计学分析  以基因计数法计算冠心病患者与正常人群的基因型和等位基因频率。用X²检验及Hardy-Weinberg平衡评估标本群体代表性。应用SPSS 12.0软件包作统计学处理。我国河南汉族冠心病组与正常人群之间等位基因及基因型频率差异用X²检验。

结果

⒈基因多态性与冠心病的关系

1.1 eNOS基因4a／b多态性、G894T多态性以及FⅦ基因R353Q多态性各基因

型在CHD组，MI组以及对照组分布均符合Hardy－Weinberg平衡。

1.2 在河南汉族正常人群中，此三个基因位点多态性的发生率均低于亚洲其他种族和欧洲人。

1.3 在河南汉族人群中，eNOS基因4a／b多态性分布在CHD组与对照组、MI组与对照组间差异均具有统计学意义；eNOS基因G894T多态性在MI组与对照组间分布差异具有统计学意义；FⅦ基因R353Q多态性分布在CHD组与对照组、MI组与对照组间分布差异均无统计学意义。

2．基因多态性与冠脉病变支数的关系

2.1  eNOS基因4a／b多态性aa＋ab十ac和bb基因型与冠脉病变支数无统计学意义

（c²=1.790，P＞0.05），提示此基因多态性与冠脉病变支数无相关性。

2.2  eNOS基因G894T多态性GT+TT和GG基因型与冠脉病变支数有统计学意义（c²=6.401，P＜0.05＝，提示此基因多态性与冠脉病变支数具有相关性。

2.3  FVII基因R353Q多态性RQ＋QQ和RR基因型与冠脉病变支数无统计学意义

(c²=1.338，P＞0.05)，提示此基因多态性与冠脉病变支数无相关性。

3. 基因多态性与经典危险因素的关系

经典危险因素（性别、糖尿病、高脂血症等）在eNOS 4a／b及FVII R353Q多态性各基因型之间无显著性差别，eNOS G894T多态性GT＋TT基因型在有高血压史或有吸烟史CHD患者中组分布频率明显高于无高血压或无吸烟史CHD患者组。

结论

1. 中国河南汉族人群存在eNOS 4a／b多态性、G894T多态性及FVII  R353Q多态性，

此三种基因多态性在人群中的分布可能存在着种族差异性。

2. 在河南汉族人群中，eNOS 4a／b基因突变可能是CHD及MI发病中的一个重要危险因素。但此基因突变与冠脉病变支数无相关性。

3. 在河南汉族人群中，eNOS G894T基因突变可能是MI发病中的一个重要危险因素。此基因突变与冠脉病变支数具有相关性。

4. 在河南汉族人群中，FVII R353Q基因突变可能不足以构成CHD及MI发病中的一个独立遗传危险因子。此基因突变与冠脉病变支数无相关性。

5. 在河南汉族人群中，eNOs G894T基因突变与吸烟史和高血压病史具有相关性。

关键词：一氧化氮合酶，凝血因子VII，基因，冠心病